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本制品是基于常规PCR技术开发的专门用于分枝杆菌属研究检测的试剂盒。

分枝杆菌属(Mycobacterium spp.)是一类细长略弯曲的，有时有分枝出现丝状体的细菌。本属细菌的主要特点是细胞壁含有大量脂质，主要是分枝菌酸。这和其染色性、生长特性、致病性、抵抗力等密切相关。一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后能抵抗强脱色剂盐酸乙醇的脱色，故又称抗酸杆菌。该菌属无鞭毛、无芽胞、不产生内、外毒素，其致病性和菌体成分有关。引起的疾病都呈慢性，并伴有肉芽肿。分枝杆菌种类较多，对人致病的主要有结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌。

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
   
2. 产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
   
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
   
4. 特异性高，引物是根据分枝杆菌属DNA高度保守区设计，in silico分析发现它只能检测分枝杆菌属，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
   
5. 本制品只能用于定性实验，不能用于定量实验。

1. 引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
   
2. 为避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。

1. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照(1×10⁴拷贝/μL，本试剂盒提供)10μL加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样)。可以直接用水作为制备的阴性对照。
   
2. 用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

3. 标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
   

   成分	N+2个 样品管	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
   2×PCR MasterMix	各10μL	10μL	10μL
   分枝杆菌属PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
   制备的N+2个DNA样品	各8μL	-	-
   超纯水	-	8μL	-
   分枝杆菌属PCR阳性对照(1×104拷贝/μL)	-	-	8μL

4. 上机进行PCR，PCR反应参数为：
   

   过程	温度	时间
   预变性	95℃	3min
   PCR反应 (30个循环)	95℃	15sec
   	60℃	60sec(采集SYBR通道的荧光信号)
   溶解曲线分析	按qPCR仪器手册执行

5. 取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%～2.0%的琼脂糖凝胶。
   
6. 阳性样品预期得到的扩增产物长度为217bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或PCR阴性对照)有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂，设备，程序，操作等)，需要重复并排查原因。
   
7. 如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。